Pierderea de grăsime matricială

Centura de sprijin pentru spate gravide

Semnalizarea factorului de creștere Abstract În timpul tranziției epiteliale-mezenchimale EMTcelulele epiteliale pierd aderența celulelor celulare, prezintă modificări morfologice și reglează expresia proteinelor cito-scheletice.

Studiile anterioare au demonstrat că întreruperea completă a contactului între celulă și celulă poate promova EMT-ul indus de factorul de creștere TGF -β1 și expresia markerului miofibroblast alfa actină musculară netedă αSMA. Aici, am căutat să examinăm modul în care prezența contactelor parțial celulă afectează EMT. O abordare de microfabricare a fost utilizată pentru a decupla efectele contactului celulă-celulă și adeziunea matricei celulare în EMT indusă de TGFβ1.

Atunci când răspândirea celulelor este controlată, prezența contactelor parțial celulă-celule îmbunătățește expresia αSMA. Mai mult, răspândirea celulelor și contactele intercelulare controlează împreună localizarea subcelulară a factorului de transcripție legat de Notch1 și miocardină MRTF -A.

Categorii populare

Aceste date sugerează că interacțiunea dintre adeziunea dintre matrice celulară și adeziunea intercelulară este un factor determinant important pentru unele aspecte ale EMT-ului indus de TGFβ1. Introducere Tranziția epitelial-mezenchimală EMT este un proces care are o importanță crucială în dezvoltarea, carcinogeneza și fibroza organelor 1, 2, 3.

EMT se caracterizează prin pierderea polarității apical-bazale a celulelor epiteliale, reglarea în jos pierderea de grăsime matricială markerilor epiteliali incluzând E-cadherina și dizolvarea joncțiunilor celulă-celulă. În plus, studiile au demonstrat că un program miogen poate fi activat în timpul EMT, ceea ce duce la exprimarea proteinelor incluzând actină musculară netedă alfa αSMAcontractilitate celulară crescută și dobândirea unui fenotip miofibroblast 2, 4, 5, 6, 7, 8.

Studii recente au sugerat că expunerea celulelor epiteliale la TGFβ1 nu este suficientă pentru a induce EMT și că perturbarea contactelor celulă-celulă este necesară și pentru EMT 6, 9, În prezența TGFβ1, EMT este promovată de-a lungul marginilor site-urilor plăgii în care celulele se confruntă cu contacte celulă-celule reduse 6, 8. Defalcarea joncțiunilor celulă-celulă prin reducerea nivelului de calciu sau reglarea e-cadherinei în combinație cu tratamentul cu TGFβ1 poate induce EMT în monostratele confluente ale celulelor epiteliale renale tubulare 7, 8.

Mai mult decât atât, monostraturile confluente ale celulelor epiteliale sunt refractive la semnalele inductive EMT ale TGFβ1 în comparație cu culturile subconfluente cu mai puține contacte intercelulare 6, 8, Cu aceste abordări, modularea contactelor celulă-celulă poate duce la variații în interacțiunile celulă-matrice sau poate influența alte căi de semnalizare celulară. De exemplu, celulele localizate de-a lungul marginilor site-urilor plagii pot prezenta o răspândire mai mare a celulelor în comparație cu celulele găsite în regiunile interioare ale unei monostraturi.

În plus, nivelurile de calciu afectează multe funcții celulare, direct sau indirect, deoarece calciul joacă roluri importante în întreținerea complexelor pierderea de grăsime matricială joncțiune celulară și servește ca al doilea mesager într-o mare varietate de căi de transductie a semnalului, inclusiv transcripția genică și contracția 12, 13, 14, Ca atare, a fost dificilă examinarea impactului contactului celulă-celulă asupra EMT, în absența altor factori.

Studiile noastre recente indică faptul că aderența celulelor ECM și zona de răspândire a celulelor sunt regulatori importanți ai dezvoltării miofibroblastelor din celulele epiteliale în timpul EMT-ului indus de TGFβ1. Contactele intact-celulă pot limita răspândirea celulelor și, prin urmare, pot avea impact asupra inducției EMT și pot reduce expresia αSMA.

Mai mult, nu este clar modul în care contactele parțial celulă-celulă cum ar fi cele experimentate de celule de-a lungul unei margini a plăgii și adeziunea celulă-ECM acționează în concert pentru a media expresia proteinelor citoscheletale și dezvoltarea miofibroblastului din celulele epiteliale.

Semnalizarea notch este importantă pentru controlul soartei celulare, incluzând diferențierea celulelor musculare netede 17, 19, 20, 21 și pierderea de grăsime matricială miofibroblastului din celulele epiteliale alveolare 22 și celulele epiteliale tubulare renale Clivajul proteolitic de Notch legat de membrană prin γ-secretază eliberează domeniul Notch intracelular NICD care se poate transfera în nucleu pentru a interacționa cu CSL pentru a promova exprimarea genelor. Mai mult, TGFβ1 a fost demonstrat că induce expresia lui Jagged1 și a represorului transcripțional reglat Notch Hey1 23, Localizarea și activitatea subcelulară a MRTF-A este controlată de organizarea citoscheletului de actină.

Cu toate acestea, sunt necesare studii suplimentare pentru a elucida modul în care contactele intercelulare și capturile de aderență celulă-ECM afectează aceste căi pentru a regla expresia αSMA în timpul EMT. Aici, am căutat să determinăm interacțiunea dintre adeziunea celulă-matrice și contactele celulă-celule în EMT indusă de TGFβ1.

Celulele au fost cultivate la diferite densități de celule și capacitatea celulelor de a suferi EMT și de a exprima markeri de miofibroblast a fost monitorizată ca funcție a zonei de răspândire a celulelor și a numărului de celule vecine prin colorarea imunofluorescenței și blotting occidentală.

Demonstrăm că inducerea EMT de TGFβ1 este controlată de o combinație de zonă de răspândire a celulelor și interacțiuni celule-celule directe. Interesant, descoperim că procentul de celule care exprimă αSMA crește atât cu aria de răspândire a celulelor, cât și cu numărul de celule vecine. Aceste date sugerează că, în anumite circumstanțe, interacțiunile celulă-celulă pot promova, de fapt, exprimarea markerilor miofibroblasti în pierderea de grăsime matricială EMT indus de TGFβ1.

Celulele epiteliale ale glandei mamare normale NMuMG au fost însămânțate la densități cuprinse între și Expresia markerilor EMT a fost apoi analizată prin colorarea imunofluorescenței și prin Western Blotting. Celulele placate la densități mari au fost refractive la TGFβ1-inducerea EMT, în timp ce celulele cultivate la densități mici au prezentat o expresie redusă a markerului epitelial E-cadherină și o expresie crescută a markerilor mezenchimali vimentin și αSMA Fig.

Celulele tratate cu TGFβ1 au prezentat o suprafață de celule proiectată crescută în comparație cu celulele de pierderea de grăsime matricială, în special la densități celulare scăzute, iar aria celulă de control proiectată și celulele tratate cu TGFβ1 au scăzut odată cu creșterea densității celulare Fig.

Mai mult, procentul de celule care exprimă αSMA a scăzut odată cu creșterea densității celulare Fig. S1a, b. Aceste date sugerează că interacțiunea dintre contactul celulă-celulă și răspândirea celulelor poate regla aspecte ale EMT. Petele albastre prezintă nucleele celulare.

Deoarece CLA este un produs absolut natural și are o origine naturală, nu există contraindicații pentru utilizarea acestuia. Relevanța pierderii în greutate în lumea modernă capătă noi dimensiuni - căutăm în mod constant noi diete și orice alte modalități de a deveni mai subțiri. Inclusiv - suplimente alimentare care favorizează pierderea în greutate. Ce este această substanță și cum te ajută să slăbești?

Bare de cantar: 50 μm. Imagine completă Interacțiunile celulă-celulă și adeziunea celulă-ECM controlează împreună expresia αSMA în timpul Cacaua arde grăsime indus de TGFβ1 Pentru a examina în continuare efectele combinate ale contactului celulă-celulă și a zonei celulare asupra expresiei αSMA induse de TGFβ1 în timpul EMT, celulele au fost plasate în insule de fibronectină tipărită cu micro-contact, cu dimensiuni cuprinse între μm 2 și 6.

Prin modificarea dimensiunii insulei, precum și a numărului de celule plasate pe fiecare insulă, s-a controlat zona de răspândire a celulelor și cantitatea de contact celulă-celulă Fig. Procentul de celule care exprimă αSMA a crescut semnificativ în celulele cu zero contacte pe măsură ce suprafața de răspândire a celulelor a crescut Fig.

Aceste date sunt în concordanță cu studiile noastre anterioare care demonstrează că răspândirea celulelor este necesară pentru expresia indusă de TGFβ1 a markerilor de miofibroblast, precum αSMA Mai mult, procentul de celule care exprimă αSMA a crescut odată cu creșterea interacțiunilor celulă-celulă pentru fiecare gamă de zone de răspândire a celulelor care a fost explorată. Aceste descoperiri sugerează că celulele pot răspunde celulelor vecine pentru a controla EMT și că, în anumite circumstanțe, interacțiunile celulă-celulă pot regla pozitiv expresia αSMA în timpul EMT-ului indus de TGFβ1.

Insulele proteice sunt conturate de o linie punctată alb. O singură celulă care exprimă αSMA este conturată de o linie punctată alb. Bare de cantar: 25 μm. Imagine completă Pentru a decupla efectele contactului celulă-celulă și a aderenței pierderea de grăsime matricială matrice celulară, am utilizat o tehnică de micropatternare care permite un control precis asupra zonei de răspândire a celulelor și a numărului de celule vecine Insulele triunghiulare sau în formă de papion de mărime definită au fost tipărite microcontact pe lamele și celulele NMuMG au fost însămânțate la o celulă pe regiune triunghiulară a papionului Fig.

Celulele tratate cu controlul vehiculului nu au prezentat nicio expresie αSMA pentru toate condițiile de cultură datele nu sunt prezentate. Aceste pierderea de grăsime matricială confirmă faptul că interacțiunile celulă-celulă pot pierderea de grăsime matricială un rol important în promovarea expresiei αSMA în timpul EMT-ului indus de TGFβ1 și sugerează că o zonă de răspândire a celulelor prag poate fi necesară pentru interacțiunea celulă-celulă indusă de αSMA.

Nutriție sportivă

Bare de scară: 20 μm. Imagine completă Contactul celular-celul direct mediază expresia αSMA în timpul EMT-ului indus de TGFβ1 Efectele interacțiunilor celulă-celulă asupra expresiei αSMA induse de TGFβ1 ar putea fi promovate de un factor solubil secretat de celule sau prin semnalizarea inițiată de contactul celulă-celulă direct între celulele vecine.

Pentru a examina rolul semnalizării paracrine în interacțiunea celulă-celulă promovată prin expresia αSMA în timpul EMT-ului indus de TGFβ1, s-au fabricat caracteristici în formă de papion în care regiunile triunghiulare μm 2 au fost separate cu 5 μm Fig. Atunci când sunt cultivate pe caracteristici separate, procentul de celule care exprimă αSMA ca răspuns la TGFβ1 a scăzut la nivelurile de celule unice Fig. Aceste date sugerează că contactul direct între celule este responsabil pentru creșterea expresiei αSMA ca răspuns la TGFβ1 observată în perechile de celule.

Scara barei: 20 μm.

Centura de sprijin pentru spate gravide — 3000 oferte pe Joom

Mai mult, activarea Notch1 depinde de contactele intercelulare; astfel, am emis ipoteza că semnalizarea Notch1 ar putea fi implicată în contactul celulă-celulă și controlul de adeziune celulă-ECM a expresiei αSMA mediate de TGFβ1.

Western blotting a arătat că tratamentul celulelor NMuMG cu TGFβ1 a indus expresia Jagged1, un ligand Notch1, în egală măsură, în celule cultivate atât la densități mici cât și înalte Fig. În urma implicării ligandului, domeniul Notch1 intracelular NICD1 este scindat și poate apoi localiza în nucleul celular pentru a promova pierderea de grăsime matricială genelor.

Aceste date sugerează că atât contactul celulă-celulă, cât și răspândirea celulelor sunt regulatori importanți ai activării Notch1 în timpul EMT-ului indus de TGFβ1. Liniile albe punctate conturează o celulă individuală. Imagine completă Pentru a examina dacă activarea Notch este necesară pentru creșterea mediată de contact celulă-celulă în celulele de expresie αSMA au fost tratate cu DAPT, un inhibitor γ-secretază care blochează clivajul domeniului intracelular Notch.

EUR-Lex - R - EN - EUR-Lex

Împreună, aceste date sugerează că efectele combinate ale contactului celulă-celulă și ale zonei de răspândire a celulelor controlează expresia αSMA indusă de TGFβ1 prin calea de semnalizare Notch1. Cultivarea celulelor NMuMG la densități mici și mari a relevat faptul că MRTF-A localizat în nucleu într-un procent mai mare de celule cultivate la densități mici decât la densități mari Fig.

Mai mult, tratamentul cu TGFβ1 pierderea de grăsime matricială celulelor cultivate la densități mici a dus la o creștere a zonei de răspândire a celulelor și la o creștere a localizării nucleare MRTF-A în comparație cu celulele tratate cu vehiculul. Dimpotrivă, când zona celulară a fost restricționată de aglomerarea celulelor la densități mai mari, doar o populație mică de celule tratate cu TGFβ1 a prezentat localizarea nucleară a MRTF-A Fig.

Aceste date sugerează că contactul celulă-celulă poate avea impact asupra localizării subcelulare MRTF-A și sunt în concordanță cu studiile publicate anterior care demonstrează perturbarea aderențelor intercelulare reglementează MRTF-A.

În lumina acestor constatări, am căutat ulterior să determinăm impactul contactelor celulă-celulă asupra localizării subcelulare MRTF-A atunci când zona de adeziv celular este controlată cu precizie.

Deshidratare extracelulara

Aceste date sugerează că localizarea nucleară MRTF-A este controlată de efectele combinate ale zonei de răspândire a celulelor și a contactului celulă-celulă. Western blotting a arătat că tratamentul cu CCG a redus expresia αSMA și caldesmon în celulele cultivate la densități celulare mici Fig. Cu toate acestea, tratamentul cu CCG nu a restabilit nivelul proteinei E-cadherin la densități de placare celulare mici sau mari. Discuţie În acest studiu, am constatat că efectele combinate ale contactului celulă-celulă și ale aderenței cu matrice celulară reglează EMT-ul indus de TGFβ1.

Cultura celulelor epiteliale la densități celulare scăzute, în care celulele individuale nu au vecini și li se permite să se răspândească, a promovat o scădere a pierderea de grăsime matricială markerilor epiteliali și o mai mare exprimare a markerilor mezenchimali.

pierderea de grăsime matricială cum să slăbești și să elimini celulita

În schimb, cultura de celule la densități mari, cu contacte intacte între celule și celule, a blocat răspândirea celulelor și a reacției celulare abrogate la indicii inductive EMT. Prin utilizarea unui sistem de model microfabricat în care contactul celulă-celulă și adeziunea dintre matrice și celulă pot fi controlate și decuplate cu precizie, am demonstrat că prezența contactelor parțial celulă-celulă poate promova expresia indusă de TGFβ1 a markerului miofibroblastului αSMA.

Pentru celulele care sunt tratate cu TGFβ1 și cărora li se permite răspândirea, contactul dintre celulă și celulă a mărit expresia αSMA. A fost propus un model cu două lovituri pentru EMT în care atât întreruperea contactelor intercelulare cât și semnalizarea TGFβ1 sunt indispensabile pentru expresia αSMA și dezvoltarea miofibroblastului 7, 35, Regiunile intacte și vătămate ale epiteliului răspund în mod diferit la tratamentul cu TGFβ1, celulele situate de-a lungul unei margini scăderea în greutate a supraviețuitorului plăgii prezintă o sensibilitate crescută la TGFβ1 în comparație cu celulele găsite în regiunea interioară a monostratelor epiteliale intacte Celulele localizate de-a lungul marginilor plăgii care prezintă contacte parțial celulă-celulă pot crește potențial în zona de răspândire a celulelor ca răspuns la tratamentul TGFβ1.

Astfel, în acest context, contactele parțial-celulă pot servi pentru a promova exprimarea αSMA și dezvoltarea miofibroblastului. Mai mult, pierderea de grăsime matricială nivelului de calciu sau reducerea reglării E-cadherinei duce la pierderea completă a contactelor celulă-celulă în monostratele epiteliale.

Interesant este că nu se așteaptă ca aceste tratamente să genereze o creștere a zonei de răspândire a celulelor, ci mai degrabă o întrerupere completă a contactelor celulă-celulă. Ca atare, gradul de contact celulă-celulă pierderea parțială sau totală a contactului poate fi important pentru reglarea fină a reglării expresiei αSMA indusă de TGFβ1. Rezultatele noastre sunt în concordanță cu acest mecanism, deoarece descoperim că celulele epiteliale cultivate la densități mari de celule sunt refractive la indicii inductive EMT Fig.

Aceste constatări sunt în concordanță cu rezultatele anterioare ale grupului nostru Studiile prezentate aici sugerează că expresia mediată de interacțiunea celulă-celulă a αSMA în timpul EMT-ului indus de TGFβ1 rezultă din contactul direct dintre celulă și nu un factor secretat.

Constatăm că Notch1 este necesar pentru creșterea pierderea de grăsime matricială αSMA datorită contactului direct între celulă și celulă, deoarece eliminarea expresiei Notch1 sau inhibarea activării Notch a abrogat expresia mediată de contact celulă-celă a αSMA atunci când celulelor li s-a permis să se răspândească. Constatăm că activarea și localizarea NICD1 în nucleul celular are loc atunci când celulelor li se permite să se răspândească, au contacte intercelulare cu vecinii și sunt tratate cu TGFβ1.

În timp ce aceste descoperiri sugerează că calea Notch este reglementată de o combinație de răspândire a celulelor și contactul celulă-celulă, sunt necesare studii suplimentare pentru a elucida mecanic modul în care zona de răspândire a celulelor afectează semnalizarea Notch.

Căile de semnalizare TGFβ și Notch pot interacționa într-o varietate de moduri. În plus, activarea Notch favorizează fosforilarea lanțului ușor miosin și activarea RhoA în celulele endoteliale 39 și este în amonte de rearanjările citoscheletale în timpul EMT-ului indus de TGFβ1 în keratinocitele 23 și celulele epiteliale ale rinichilor umani Aici, descoperim că nivelurile relative de actină filamentoasă și miozină fosforilată cresc cu o creștere a ariei de răspândire a celulelor, dar nu sunt afectate în mod semnificativ de contactul celulă-celulă Fig.

Aceste descoperiri sugerează că activarea Notch nu reglementează semnalizarea MRTF-A prin controlul citoscheletului din acest sistem. Aceste date pierderea de grăsime matricială că contactele parțial celulă-celulă pe care le experimentează celulele epiteliale de-a lungul unui loc de rană pot servi la promovarea expresiei αSMA și a miofibroblastului induse de TGFβ. Ca atare, direcționarea aderențelor celulare, Notch1 sau MRTF-A pot fi utile pentru prevenirea dezvoltării miofibroblastului din celulele epiteliale în condiții patologice sau pentru promovarea dezvoltării miofibroblastului de-a lungul epiteliului rănit pentru a ajuta la vindecarea rănilor.

Modelarea substraturilor prin imprimare microcontactă Imprimarea pierderea de grăsime matricială micro-contact a fost utilizată pentru a imprima insulelor de fibronectină pe lamele de sticlă acoperite cu polidimetilsiloxan PDMS; Dow Corning.

Plăcile de siliciu scădere de grăsimi și pierdere în greutate au fost modelate prin tehnici standard de fotolitografie și au fost utilizate pentru a arunca ștampile PDMS 43, Ștampilele șablonului au fost oxidate cu UV timp de 7 minute și au adus pierderea de grăsime matricială contact conformal cu ștampilele fără caracter pentru a îndepărta fibronectina.

Ștampilele au fost apoi aduse în contact conformal cu folii de sticlă acoperite cu PDMS pentru a transfera insulele de fibronectină de formă și dimensiune definite pe suprafața capacului.

pierderea de grăsime matricială a fi anemic te face să slăbești

După clătirea cu 1 x PBS, celulele au fost placate în mediul de cultură celulară la copertine micropatternate. După 30 de minute, s-au clătit probele pentru a îndepărta celulele neaderente. Analiza curbei de topire a fost efectuată pentru a verifica dacă a fost obținut pierderea de grăsime matricială singur produs PCR pentru pierderea de grăsime matricială probă. Actina filamentoasă a fost colorată utilizând falloidina marcată fluorescent Life Technologies după protocolul sugerat de producător.

Înainte de realizarea imaginilor, probele au fost montate pentru a acoperi diapozitive folosind Fluoromount-G Electron Microscopy Sciences.

pierderea de grăsime matricială pierdere în greutate newcastle nsw

Zona proiectată de celule, numărul de celule vecine și expresia proteinelor au fost examinate folosind software-ul ImageJ. Bordurile celulare au fost urmărite în cadrul imaginilor de contrast de fază și numărul de celule vecine a pierderea de grăsime matricială determinat pe baza numărului de celule adiacente. Procentul de celule care exprimă αSMA a fost calculat determinând numărul de celule care exprimă αSMA și divizând la numărul total de celule examinate.

Pentru a determina localizarea subcelulară a NICD1 și MRTF-A, intensitățile de fluorescență nucleară au fost comparate cu intensitățile de fluorescență citoplasmice din celule.

Celulele cu NICD1 sau MRTF-A au o intensitate de fluorescență nucleară de două ori mai mare decât intensitățile de fluorescență citoplasmice au fost clasificate drept localizate nucleare.

  • Sindromul de deshidratare acută la copil » Secțiunea: Boli și afecțiuni
  • Pierderea de grăsime și zahăr
  • Cum să faceți să pierdeți grăsimea strânsă
  • Arzatoare de grasime ideallean
  • Slabire 3d
  • Cum să slăbești în timp ce te chinui

Toate experimentele au fost efectuate de cel puțin trei ori, cu excepția cazului în care sunt menționate, iar datele arătate sunt media ± eroare standard a mediei. Analiza statistică a fost efectuată folosind testul t al unui student cu două cozi sau analiza de varianță ANOVAurmată de corecția post-hoc Bonferroni folosind software-ul Kaleidagraph v2. Informatie suplimentara.

Asevedeași